Inwazyjna diagnostyka zakażeń grzybicznych

Na  oddziałach wysokiego ryzyka przebywają pacjenci z  obniżoną odpornością, dla których niezbędna jest intensywna terapia, jak i  szybka diagnostyka inwazyjna zakażeń grzybicznych, do  której wykorzystuje się np. ß-Glucan Test (FUJIFILM Wako Chemicals Europe GmbH, Niemcy) służący do  ilościowego oznaczania in  vitro poziomu (1  → 3)-ß-D-glukanu w  surowicy lub osoczu metodą turbidymetryczną.

W  przeciwieństwie do  tradycyjnych narzędzi diagnostycznych, w  przypadku których na  potwierdzenie rozpoznania zakażenia czekamy wiele dni, diagnostyka zakażeń grzybicznych przeprowadzona za pomocą ß-Glucan pozwala na  uzyskanie wstępnej odpowiedzi w  ciągu 90  minut, cechuje się dużą precyzją i  brakiem zakłóceń powodowanych hemolizą, zawartością bilirubiny lub leków przeciwgrzybiczych. (1  → 3)-ß-D-glukan jest integralnym składnikiem ściany komórkowej większości patogennych grzybów, m.in. z  rodzajów Aspergillus i  Candida oraz gatunku Pneumocystis jirovecii. W  przebiegu zakażenia małe ilości tej substancji są  uwalniane do  krwi. Odczynnik LAL (limulus amebocyte lisate) z  ekstraktu komórek krwi krabów podkowiastych reaguje z  (1  → 3)-ß-D-glukanem oraz z  endotoksyną. Endotoksyna w  próbce jest inaktywowana przez ogrzewanie w  temp. 70°C  przez 10  minut z  roztworem do  obróbki wstępnej, który zawiera niejonowy detergent i  polimyksynę B.

Ta  procedura dezaktywuje również potencjalne inhibitory białkowe. Następnie odmierzoną objętość uzyskanego roztworu (0,2  ml) dodaje się do  fiolki z  odczynnikiem LAL; (1  → 3)-ß-D-glukan zawarty w  próbce aktywuje czynnik G,  który inicjuje reakcję kaskadową, prowadzącą do  zmiany zmętnienia roztworu. Po  wprowadzeniu próbki do  urządzenia Toxinometer MT-6500 odczyt uzyskuje się w  ciągu 90  minut. Zakres pomiarowy testu wynosi 6-600 pg/ml  z  punktem odcięcia 11  pg/ml. W  przypadku zakażeń wywołanych przez Pneumocystis jirovecii i  szczepy Candida czułość wynosi 100%, dla Aspergillus jest nieco mniejsza (82,1%), zaś swoistość dla każdego z  nich osiąga poziom 87,5%.

Czytaj także: Koszty leczenia zakażeń w Oddziale Intensywnej Terapii